今天是2019年的第yi個周一，從今天開始，安譜實驗微xin公眾號將在每周一（法定節(jié)假日除外）準時發(fā)布一條干貨，力爭從用戶視角出發(fā)，用更多更全面的專業(yè)內(nèi)容，為廣大實驗室科研人員搭建一個實用、專業(yè)的學(xué)習(xí)平臺，歡迎大家持續(xù)關(guān)注！

     好了，現(xiàn)在就開始今天的干貨放送吧！

小柱“便秘”怎么辦？

     在進入主題之前，先簡單介紹下固相萃取（SPE）技術(shù)。

     固相萃?。⊿olid Phase Extraction，簡稱 SPE）技術(shù)，發(fā)展于上世紀 70 年代，由于其具有高效、可靠、消耗試劑少等優(yōu)點，在許多領(lǐng)域取代了傳統(tǒng)的液－液萃取而成為樣品前處理的有效手段， 在實驗室中得到了越來越廣泛的應(yīng)用。它利用分析物在不同填料中被吸附的能力差將目標物提純，有效地將目標物與干擾物分離，大大增強對分析物，特別是痕量分析物的檢出能力，提高了被測樣品的回收率。

     萬千世界的奇妙，造就了樣品基質(zhì)的千差萬別，蔬菜，水果，肉蛋奶，水，土壤， 橡膠，紡織品等等，不管是食品還是環(huán)境的樣品，復(fù)雜程度也是各不相同。復(fù)雜程度一般的樣品可以用簡單提取作為前處理方法，但是對于特別復(fù)雜的樣品就需要經(jīng)過特殊的前處理，比如用SPE 小柱，做進一步的凈化，把目標物和雜質(zhì)分離，進而在色譜儀器上得到一個漂亮色譜圖，大家看現(xiàn)行的一些標準就會發(fā)現(xiàn)，有些樣品基質(zhì)的前處理肯定是會用到 SPE 手段的。

     在用到 SPE 前處理的時候，各位分析檢測工程師碰到煩人令人抓狂的問題是不是流速慢、流速不均、堵、下不去的情況；過小柱過到令人崩潰，既然流速都保證不了，怎么敢奢求回收率。

     沒關(guān)系，安譜實驗憑借多年來在樣品前處理領(lǐng)域的深厚積累，教您幾招，治liao小柱“便秘”的難題。

     SPE 的基本操作，包括活化、平衡、上樣、淋洗、洗脫，五個步驟。問題無外乎出現(xiàn)在這幾個步驟里面，別急，我們一個個過來看。

活化平衡

     一般反相或者離子交換類型的小柱分別用到甲醇和水進行活化和平衡，正相小柱會用到石油醚或者正己烷來活化平衡。

1) 填料裝填過緊導(dǎo)致流速過慢。 可以通過加壓加快流速，或者購買對流速有嚴格質(zhì)控廠家的產(chǎn)品解決，安譜實驗對 CNW 小柱每個批次的流速都有嚴格的質(zhì)控范圍，質(zhì)控范圍之外的小柱會被剔除。

2) 填料粒徑過小導(dǎo)致流速變慢。 比如同樣的活化溶劑下，100-200 目的 florisil 就會比60-100 目的更慢些。 可以根據(jù)樣品基質(zhì)類型和使用習(xí)慣選擇合適規(guī)格的小柱。

3) 柱管體積差異。 500mg 3mL； 500mg 6mL， 這兩種規(guī)格形成的填料高度不一樣，顯然 500mg 6mL，直徑大，填料高度低，流速相對就快，就像地鐵站早高峰，閘口多，通過速率快，閘口少，自然就擁堵，通過速率慢?？筛鶕?jù)樣品基質(zhì)類型和使用習(xí)慣選擇合適柱管的小柱。

4) 溶劑順序加錯。對于反相類型小柱，如果不小心把水當成活化溶劑，就會出現(xiàn)流速很慢的問題，因為水對于疏水性反相填料的浸潤性是很差的，所以不小心把水當成甲醇來活化，可能等到花兒都謝了，它還是流不下來，注意別加錯哦。

5) 活化和平衡溶劑不互溶。比如二氯甲烷活化，水平衡小柱，大家就會發(fā)現(xiàn)，水加入后，流速也會慢到讓你崩潰。 這是因為水和二氯甲烷的互溶性差造成的，可以加入過渡溶劑甲醇來解決，甲醇既可以與二氯甲烷互溶也可以和水互溶。

6) 空氣進入填料。這個原因比較常見但也是比較難發(fā)現(xiàn)的原因， SPE 小柱是由篩板，填料，柱管組成，不是有機的整體，所以在運輸尤其是長途運輸?shù)倪^程中，就會出現(xiàn)微小的松動，導(dǎo)致空氣進入填料，一般不容易被肉眼所發(fā)現(xiàn)。含有空氣的填料在氣壓的作用下導(dǎo)致活化溶劑流下速度很慢。說到這大家可能就容易理解為什么同一批次的小柱，會出現(xiàn)輕微的流速參差不齊的情況，可以用 SPE 裝置加正壓的方式抽掉空氣后，再一起加溶劑。

上樣

     由于樣品基質(zhì)的復(fù)雜性，篩板孔徑在 20um，在上樣之前需要把顆粒物給過濾掉，比如含蛋白的樣品需要加酸、鹽、有機溶劑、加熱等方式將蛋白處理掉；對于一般的基質(zhì)，應(yīng)采用過濾，離心或者高速離心，換大孔徑填料等方式進行處理，現(xiàn)在好多第三方檢測單位樣品量非常多，但是該做的前處理步驟不能省，否則對儀器的損壞，對數(shù)據(jù)的可靠性都會有一定的影響。

淋洗和洗脫

      一般在淋洗和洗脫這兩步出現(xiàn)流速慢的情形比較少，因為淋洗和洗脫都是不帶基質(zhì)的純?nèi)軇话闵蠘硬襟E沒有堵塞，就不會影響到淋洗和洗脫。可能出現(xiàn)流速慢的地方在于淋洗完小柱并干燥之后，因為一旦干燥小柱，就會使空氣進入填料，這就回到了活化平衡導(dǎo)致流速慢的第 6 個原因，只要稍微加壓就可以解決問題了。

     當然我們在做實驗的時候，不是每個步驟都要求快，魯迅說過：欲速則不達，所以在小柱操作技巧里面，有兩個步驟是需要控制流速的， 分別是上樣和洗脫；這兩個過程是目標物與柱填料通過分子間作用力進行吸附和解吸附的過程，需要時間慢慢作用，大家一定要注意呦！

這一次干貨時間就為大家分享到這里，

下次再見！